肝細胞培養(yǎng)試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。

 

　　今天小編要與大家分享的是肝細胞培養(yǎng)試劑盒的操作步驟：

 

　　1、標本的采集及保存：

 

　?。?）血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

 

　?。?）血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000xg離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

 

　?。?）細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000xg離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

 

　?。?）樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10，000倍。

 

　　2、試劑的準備：

 

　　按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑，胰島素elisa試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的，自配的緩沖液應用pH計測量較正，從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

 

　　3、加樣：

 

　　分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

 

　　4、溫育：

 

　　用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

 

　　5、洗滌：

 

　　小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

 

　　6、顯色：

 

　　每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

 

　　7、測定：

 

　　以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。